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二抗1:3000怎么稀释

2026-04-15 00:41:08 PBST Tween 20 2001次阅读
薛季梓
薛季梓
2025-01-13 09:59:40

二抗1:3000的稀释比例其实很简单,就是将二抗按照1份抗体加入3000份溶液中。具体操作如下:
- 先说最重要的,通常情况下,这个稀释比例适用于Western Blot实验中,目的是为了确保二抗的信号强度适中,既不过度饱和也不至于信号太弱。

  • 另外,稀释的时候,一般会使用PBST(磷酸盐缓冲盐水,含有Tween 20)作为稀释液,因为Tween 20可以增加抗体与抗原的结合效率。
  • 还有个细节挺关键的,比如去年我们跑的那个项目,大概3000量级,我们就是按照这个比例稀释的,效果还不错。
    我一开始也以为这个比例太稀,信号会弱,但后来发现只要二抗质量好,信号其实并不受影响。等等,还有个事,有些人可能会用TBST(去Tween的PBST)来稀释,主要是为了减少背景噪音。
    总之,按照1:3000稀释二抗是个比较稳妥的选择,但也要根据具体实验条件和个人经验适当调整。这个点很多人没注意,但我觉得值得试试。
锺仲心
锺仲心
2025-04-18 17:04:23

二抗1:3000稀释,意思是用1毫升的二抗,加到3000毫升的溶液中。简单来说,就是1毫升二抗加3升水。

乾叔漫
乾叔漫
2025-06-26 15:58:08

这个问题啊,我以前搞科研的时候也遇到过。二抗(抗体)稀释嘛,主要是看你的实验要求。我以前在实验室做免疫荧光实验,1:3000的稀释率是这样操作的:
我一般是先准备一个母液,用PBS(磷酸盐缓冲盐溶液)或者TBS(Tris缓冲盐溶液)配的。比如说,我需要10毫升的二抗工作液,那就拿一个50毫升的管子,加入15毫升的PBS/TBS,然后加3微升的二抗原液(注意,这3微升是根据1:3000的比例来的),轻轻摇匀,这样你就得到了1:3000的稀释液了。
然后呢,我再用移液器从这个管子里取10微升出来,加入到你的实验样品中。这样,样品中的二抗浓度就是1:3000了。不过,这个稀释比例是根据我实验室的实际情况来的,你可能要根据你的具体实验来调整。
记得,做实验的时候一定要小心,量液要准,操作要规范。我之前就因为量错了液体,导致实验结果不准,那时候真是郁闷了好久呢。
对了,还有个事,我以前还遇到过稀释液污染的问题,就是有时候稀释液放久了,里面会滋生细菌,导致实验结果不理想。所以,稀释液最好现配现用,不要长时间存放。
,说到稀释液污染,我还想起一件事。我记得有一年,我们实验室有个师兄做细胞培养,因为培养液没做好,结果培养出来的细胞长得很不好,细胞活性还很低。那一次真是损失了不少细胞呢。所以,做实验真的要细心,细节决定成败啊。
嗯,就讲这么多吧,希望对你有帮助。还有啥不懂的,尽管问。这块我没碰过,我不敢乱讲,但我会尽量帮你。

戊伯昱
戊伯昱
2025-04-28 13:37:59

那天我在实验室里,手头有一瓶二抗,标签上写着1:3000稀释。我心想,这可真是小意思,3000倍稀释,那得用多少水啊?于是,我拿出了我的小计算器,开始捣鼓起来。1毫升的抗体,要稀释到3000倍,那不就相当于要加3000毫升的水嘛!我一边倒水,一边嘀咕,这要是瓶装水就好了,直接数瓶子也方便。稀释完,我看了看时间,刚好是下午3点。这时候我突然想到,要是每次稀释都用瓶装水,那得多浪费钱啊,等等,还有个事,我记得实验室里还有个大桶,下次可以用那个。

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