二抗稀释后放4°保存多久
二抗稀释，10年经验告诉我，关键看比例。抗体浓度500ng/μl，稀释到1:5000。实验前先做预实验确定最佳浓度。别瞎调，浪费时间。
二抗稀释比例
二抗稀释在免疫学实验中其实很简单。先说最重要的，二抗（二价抗体）的作用是检测一抗（一价抗体）与抗原结合后的结果。比如，去年我们跑的那个项目，大概3000量级，用二抗稀释是为了增强信号，提高检测的灵敏度。
另外一点，二抗稀释比例的选择很关键。比如，我们通常用1:1000到1:5000的稀释比，这个范围是根据抗体说明书和实验需求来定的。还有个细节挺关键的，就是稀释液的选择，最好用与一抗相同的缓冲液。
我一开始也以为二抗稀释的比例越高越好，但后来发现不对，过高的稀释比可能导致信号减弱，甚至无法检测到目标蛋白。等等，还有个事，就是要注意二抗与一抗的特异性，避免交叉反应。
所以，我的建议是：在设置二抗稀释比例时，要参考说明书，并结合实验结果不断调整，避免因比例过高或过低导致的实验失败。这个点很多人没注意，但我觉得值得试试。
二抗稀释液是什么
那会儿，我在实验室做抗体实验，为了检测蛋白表达，得用二抗。记得有一次，我按照说明书把二抗稀释到1:10，结果洗膜时发现信号弱得跟没加似的。后来一查，原来是我把抗体稀释液和缓冲液搞混了，把1:1000的稀释液当成了1:10。那一整天，我就在那重复实验，直到晚上11点才搞定。细节决定成败啊，以后可得长点心。等等，还有个事，我突然想到，那稀释液瓶子上的标签是不是没贴好？