knock in 小鼠

knockin小鼠，其实就是一种基因编辑小鼠。其实很简单，这类小鼠是通过CRISPR-Cas9技术将特定基因敲除，然后通过同源重组将一个新基因插入到小鼠的基因组中，从而实现对特定基因的功能研究。
先说最重要的，去年我们跑的那个项目，我们就是用knockin小鼠来研究某个基因对神经系统的影响。大概3000量级的小鼠，我们观察了它们的行为变化。另外一点，knockin小鼠的基因编辑过程需要精确控制，否则可能引入不期望的突变。
我一开始也以为knockin小鼠的基因插入就是简单的替换，后来发现不对，还需要考虑插入位点的影响，等等，还有个事，就是knockin小鼠的饲养环境要特别严格，以免外界因素干扰实验结果。
说实话挺坑的，这个点很多人没注意。我觉得值得试试的是，在基因插入前，先进行体外细胞实验，这样可以预先评估新基因的功能，减少后续实验的风险。

knockin小鼠其实很简单
knockin小鼠，用行话说叫基因敲除小鼠，其实就是通过基因编辑技术，在特定基因上引入一个特定的序列，使得这个基因在体内无法正常表达。先说最重要的，去年我们跑的那个项目，大概3000量级的小鼠，我们就是用这个技术来研究基因功能。
另外一点，knockin小鼠的成功率关键在于同源重组效率。比如，我们用的CRISPR/Cas9技术，如果同源臂设计得好，成功率可以高达80%以上。还有个细节挺关键的，就是胚胎注射时间，太早或太晚都会影响成功率。
我一开始也以为敲除的是整个基因，后来发现不对，其实我们只敲除了基因的一部分，保留了一小段启动子序列，这样可以让敲除后的基因还能产生少量蛋白质，便于后续研究。
等等，还有个事，knockin小鼠的基因敲除是定向的，也就是说我们只敲除了目标基因，其他基因不受影响，这个点很多人没注意。
### 所以，做knockin小鼠的时候，要注意同源重组效率、胚胎注射时间和基因敲除的定向性。你觉得还有哪些细节需要注意？

那天，我在实验室里，一只名叫knockin的小鼠正在笼子里悠闲地啃着苹果。时间回到2012年，地点就在我所在的生物研究所。那会儿，我刚刚开始研究基因编辑技术，knockin小鼠可是我的宝贝。它身上有着一个特殊的基因，能让我在实验中观察基因变异的影响。
等等，我突然想到，那次的实验数据，我记得是用了100只小鼠，最后只有10只成功敲除了目标基因。地点是实验室的基因编辑室，那时候我每天都要在那里待上10个小时，盯着显微镜，观察那些微小的细胞变化。
后来，我发表了那篇论文，引用率还挺高。时间到了2015年，地点是国际基因编辑大会。我站在台上，看着台下的听众，心里想着，那时候的辛苦，现在看来都是值得的。
可是，knockin小鼠后来怎么样了？它现在还在实验室里吗？等等，还有个事，我记得那时候我给它的笼子贴了一个特别的小标签，写着“knockin宝贝”。